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技術文章
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2023-1010
樣本種類繁多且復雜，有些樣本，要想提取到質量良好的RNA是非常困難的，那么該如何確認RNA的質量呢？讓我們一起來看看吧！確認RNA的質量有以下兩種常見方法1）檢測RNA溶液的吸光度280、320、230、260nm下的吸光度分別代表了核酸、背景（溶液渾濁度）、鹽濃度和蛋白等有機物的值。一般的，我們只看OD260/OD280（Ratio，R）。1.82.0時，我們認為RNA中蛋白或者時其他有機物的污染是可以容忍的，不過要注意，當你用Tris作為緩沖液檢測吸光度時，R值可能會大于...
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分子生物學實驗中經常需要對樣本進行濃度和純度的測定，它相當于一種質控，以此來確保下游實驗的結果可靠。那么該如何提高DNA純度測定的準確性呢？讓我們一起來看看吧！常用的DNA濃度/純度測定設備是紫外分光光度計，它的原理是利用物質分子對紫外可見光譜區的輻射吸收來進行分析物質成分。假設現在有一樣物質A，它溶解在溶液內，當光照射溶液時，溶液內的A會吸收一部分的光。不同顏色的光有不同的波長，A對不同顏色的光（不同波長）的吸收程度是不一樣的。雙鏈的DNA，它能對波長為260nm的光進行強...
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不同組織RNA提取原理是將細胞裂解，釋放出RNA，并通過不同方式去除蛋白，DNA等雜質，最終獲得高純度RNA產物的過程。那么你知道常見的RNA提取方法有什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、酚氯仿抽提（有機試劑抽提）原理：將被裂解的生物樣本，混勻離心分相以后，RNA在上層水相，DNA，蛋白質在中間層，下層有機相。收集水相加入乙醇或異丙醇可沉淀RNA，漂洗后得到RNA。優點：得率高、可提取到含miRNA和其他小RNA在內的總RNA。缺點：用到苯酚、氯仿等有毒試劑。二、硅膠柱法抽提原理...
查看更多2023-109
實驗室工作中，經常會需要用到純化的DNA，這時我們通常需要使用一個商業的DNA提取試劑盒對目的DNA進行分離純化。那么我們該如何選擇合適的DNA提取試劑盒呢？讓我們一起來看看吧！一、試劑盒組分目前大多數DNA提取試劑盒遵循相同的基本步驟:裂解，柱純化，洗滌雜質，柱洗脫。然而，不同的盒子在完成每個步驟的方式上有很大的不同。二、使用的樣本類型不同的DNA來源有不同的試劑盒，從實驗室培養的細胞，到臨床樣本，土壤樣本，甚至指紋，也有許多專門用于某些應用的試劑盒。例如，土壤中的腐殖酸或...
查看更多2023-109
如今，大多數實驗室都使用商業DNA提取試劑盒，這些試劑盒使用硅膠自旋過濾法來獲得高質量的DNA。這些可以快速有效地純化DNA（或RNA）。那么DNA提取試劑盒的原理是什么呢？讓我們一起來看看吧！一、RNA和DNA提取裂解：裂解公式可能因您要提取DNA還是RNA而異，但共同點是含有高濃度離液鹽的裂解緩沖液。Chaotropes（離液劑）的作用：Chaotrope會破壞氫鍵及疏水間的相互作用。離液鹽包括鹽酸胍、硫氰酸胍、尿素和高氯酸鋰。洗滌劑：除了離液劑外，裂解緩沖液中通常還有一...
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